品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農業(yè),制藥 | | |
一、介紹
豬藍耳病毒PCR核酸檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR增強劑、上樣染料等所有PCR所需要的成分,用戶只需加入模板和引物即可進行PCR反應,具有廣泛的用途。
細胞炎癥因子檢測試劑盒的主要組成部分包括特異性抗體、酶標記物、底物、標準品和其他輔助試劑。這些試劑共同作用,使得細胞因子能夠被特異性地捕獲、識別和定量。
1. 方便,用戶只需準備模板和引物既可以進行PCR實驗。
2. 快捷,操作步驟已經(jīng)限度地簡化,能減少污染,降低實驗誤差。
3. 本產(chǎn)品A型含電泳染料,PCR反應液可直接上樣電泳,進一步簡化了操作。
4. 由于各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化,反應的靈敏度高,特異性強。能擴增各種常見的DNA樣品。
5. 產(chǎn)物可直接用于T載體克隆,不需要額外的加A反應。
使用及效果:將本產(chǎn)品15μL與用戶自備的模板,引物和水共15μL混合后,直接進行PCR反應(PCR參數(shù)由用戶自己確定),反應結束后直接取10μL電泳檢查擴增結果。
二、組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)。
2、標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200U/L,100U/L,50U/L,25U/L,12.5U/L,6.25U/L,3.12U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔0U/L。如配制100U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、樣品稀釋液:1×20ml。
4、檢測稀釋液A:1×10ml。
5、檢測稀釋液B:1×10ml。
三、使用及效果:
PCR反應特點:
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
?、僖锱c模板DNA特異正確的結合;
?、趬A基配對原則;
?、跿aq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
?、馨谢虻奶禺愋耘c保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。